Mutations in the helix αC of the catalytic domain from the EGFR affect its activity in cervical cancer cell lines.

The EGFR is a protein that belongs to the ErbB family of tyrosine kinase receptors. The EGFR is often overexpressed in human carcinomas. Amplification of the EGFR gene and mutations in the EGFR tyrosine kinase domain occur in patients with cancer. In cervical cancer, the expression level of the EGFR protein appears to directly associate with human papillomavirus infection. Our previous research demonstrated that in the cervical cancer cell lines, CALO and INBL, the EGFR is non-phosphorylated. The aim of the current study was to analyze the catalytic activity of the isolated EGFR and the presence of mutations in the control region αC. Catalytic activity was assessed by a universal in vitro kinase assay using polyGluTyr as a substrate, and the proteins were visualized by western blotting. For mutation analysis, DNA from CALO and INBL cell lines was isolated, and PCR was used to amplify the exons corresponding to the helix αC in the EGFR. The PCR products were visualized by agarose gel electrophoresis. The bands were isolated using a Zymoclean Gel DNA Recovery kit and directly sequenced. The EGFR, which was isolated and analyzed using the in vitro kinase assay, had catalytic activity. The receptor contained some mutations in the helix αC of the catalytic domain in both cell lines. The observed changes in the amino acid sequence may induce a different spatial arrangement and, therefore, a different conformation, which may confer different activities to this receptor. Thus, it was concluded that non-phosphorylated EGFR has catalytic activity, and it bears some amino acid changes in the helix αC of the catalytic domain in the CALO and INBL cells. These results suggest that the EGFR may function as an activator of other ErbB family receptors in these cervical cancer cells.

Ectyoplasin, a novel cytotoxic cyclic peptide from Ectyoplasia ferox sponge.

A new cyclic heptapeptide, ectyoplasin (1), was isolated from a methanol extract of the sponge Ectyoplasia ferox. The planar structure of 1, cyclo(-Leu1-Asn2-Ala3-Val4-Thr5-Pro6-Gly7-), was determined by one and two-dimensional NMR spectroscopy and high-resolution tandem mass spectrometry. Its absolute stereochemistry was solved by Marfey's method. The in vitro assays show that ectyoplasin (1) possess significant cytotoxic activity (2.9 - 23.5 µM) against the cell lines, DU-145 (human prostate cancer), Jurkat (human T-cell acute leukaemia), MM144 (human multiple myeloma), HeLa (human cervical carcinoma) and CADO-ES1 (human Ewing's sarcoma). The DU-145 cell line showed apoptotic cell death in response to ectyoplasin (1) treatment.

Squamins C-F, four cyclopeptides from the seeds of Annona globiflora.

Four cyclic octapeptides, squamins C-F, were isolated from the seeds of Annona globiflora Schltdl. These compounds share part of their amino acid sequence, -Pro-Met(O)-Tyr-Gly-Thr-, with previously reported squamins A and B. Their structures were determined using NMR spectroscopic techniques together with quantum mechanical calculations (QM-NMR), ESI-HRMS data and a modified version of Marfey's chromatographic method. All compounds showed cytotoxic activity against DU-145 (human prostate cancer) and HeLa (human cervical carcinoma) cell lines. Clearly, A. globiflora is an important source of bioactive molecules, which could promote the sustainable exploitation of this undervalued specie.

El Sodium caseinate and alfa-casein inhibit proliferation of the mouse myeloid cell line 32D clone 3 (32Dcl3) via TNF-α / El caseinato de sodio y la caseína α inhiben la proliferación de la línea celular mieloide de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) mediante el TNF-α.

Introduction: Sodium caseinate (CS) and its components (alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein) have been shown to inhibit the proliferation of the mouse hematopoietic 32D clone 3 (32Dcl3) cell line and induce its differentiation into macrophages. It is well-known that alpha-casein induces IL-1ß production and that this cytokine inhibits the proliferation via the production of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), but it is not known if CS and the caseins inhibit the proliferation via TNF-alpha production. Objective: To evaluate if CS and alpha-casein, beta-casein and kappa-casein inhibit the proliferation on 32Dcl3 cell line via TNF-alpha. Materials and methods: We used different concentrations of CS, alpha-casein, betacasein and kappa-casein in 32Dcl3 cells to evaluate cell proliferation. We assessed cell viability by MTT, induction to apoptosis by flow cytometry, and TNF-alpha synthesis by ELISA. Additionally, we performed anti-TNF-alpha neutralization assays on 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein and we evaluated proliferation. Results: The results showed that CS, alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein reduced proliferation of the 32Dcl3 cell line without affecting the viability and that only CS and alpha-casein induced apoptosis and the release of TNF-alpha. The 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein reestablished their proliferation by using anti-TNF-alpha antibodies. Conclusion: TNF-alpha was the main responsible for the inhibition of proliferation in 32Dcl3 cells treated with CS or alpha-casein.

Introducción. Se ha demostrado que el caseinato de sodio y sus componentes (caseínas α, ß y κ) inhiben la proliferación de la línea celular hematopoyética de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) e inducen su diferenciación hacia macrófagos. Se sabe que la caseína α induce la producción de IL-1ß y que esta última citocina inhibe la proliferación celular mediante la producción del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), pero se desconoce si el caseinato de sodio y las caseínas inducen la producción de TNF y si este es el responsable de la inhibición de la proliferación. Objetivo. Evaluar si el caseinato de sodio y las caseínas α, ß y κ inhiben la proliferación de la línea celular 32Dcl3 mediante la producción de TNF-α. Materiales y métodos. Se usaron diferentes concentraciones de caseinato de sodio y de las caseínas α, ß y κ en las células 32Dcl3. Posteriormente, se evaluaron la viabilidad celular mediante una prueba con el MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol], la inducción de apoptosis con la citometría de flujo y la síntesis del TNF-α con el ELISA. Además, se hicieron pruebas de neutralización con anti-TNF-α en células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio y caseína α, y se evaluó la proliferación celular. Resultados. Se encontró que el caseinato de sodio y las caseínas α, ß y κ reducían la proliferación de la línea celular 32Dcl3 sin afectar la viabilidad, y que solo el caseinato y la caseína α inducían la apoptosis y la liberación al medio de TNF-α. La proliferación de células 32Dcl3 tratadas con caseinato y caseína α se restableció al usar anticuerpos anti-TNF-α. Conclusión. El TNF-α fue el principal responsable de la inhibición de la proliferación en las células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio o caseína α.

El caseinato de sodio y la caseína α inhiben la proliferación de la línea celular mieloide de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) mediante el TNF-α / Sodium caseinate and alfa-casein inhibit proliferation of the mouse myeloid cell line 32D clone 3 (32Dcl3) via TNF-α

Resumen Introducción. Se ha demostrado que el caseinato de sodio y sus componentes (caseínas α, β y κ) inhiben la proliferación de la línea celular hematopoyética de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) e inducen su diferenciación hacia macrófagos. Se sabe que la caseína α induce la producción de IL-1β y que esta última citocina inhibe la proliferación celular mediante la producción del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), pero se desconoce si el caseinato de sodio y las caseínas inducen la producción de TNF y si este es el responsable de la inhibición de la proliferación. Objetivo. Evaluar si el caseinato de sodio y las caseínas α, β y κ inhiben la proliferación de la línea celular 32Dcl3 mediante la producción de TNF-α. Materiales y métodos. Se usaron diferentes concentraciones de caseinato de sodio y de las caseínas α, β y κ en las células 32Dcl3. Posteriormente, se evaluaron la viabilidad celular mediante una prueba con el MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol], la inducción de apoptosis con la citometría de flujo y la síntesis del TNF-α con el ELISA. Además, se hicieron pruebas de neutralización con anti-TNF-α en células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio y caseína α, y se evaluó la proliferación celular. Resultados. Se encontró que el caseinato de sodio y las caseínas α, β y κ reducían la proliferación de la línea celular 32Dcl3 sin afectar la viabilidad, y que solo el caseinato y la caseína α inducían la apoptosis y la liberación al medio de TNF-α. La proliferación de células 32Dcl3 tratadas con caseinato y caseína α se restableció al usar anticuerpos anti-TNF-α. Conclusión. El TNF-α fue el principal responsable de la inhibición de la proliferación en las células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio o caseína α.

Abstract Introduction: Sodium caseinate (CS) and its components (alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein) have been shown to inhibit the proliferation of the mouse hematopoietic 32D clone 3 (32Dcl3) cell line and induce its differentiation into macrophages. It is well-known that alpha-casein induces IL-1β production and that this cytokine inhibits the proliferation via the production of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), but it is not known if CS and the caseins inhibit the proliferation via TNF-alpha production. Objective: To evaluate if CS and alpha-casein, beta-casein and kappa-casein inhibit the proliferation on 32Dcl3 cell line via TNF-alpha. Materials and methods: We used different concentrations of CS, alpha-casein, beta-casein and kappa-casein in 32Dcl3 cells to evaluate cell proliferation. We assessed cell viability by MTT, induction to apoptosis by flow cytometry, and TNF-alpha synthesis by ELISA. Additionally, we performed anti-TNF-alpha neutralization assays on 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein and we evaluated proliferation. Results: The results showed that CS, alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein reduced proliferation of the 32Dcl3 cell line without affecting the viability and that only CS and alpha-casein induced apoptosis and the release of TNF-alpha. The 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein reestablished their proliferation by using anti-TNF-alpha antibodies. Conclusion: TNF-alpha was the main responsible for the inhibition of proliferation in 32Dcl3 cells treated with CS or alpha-casein.

El caseinato de sodio incrementa número de linfocitos B en ratones / Sodium caseinate increases the number of B lymphocytes in mouse

Introducción. El caseinato de sodio, una sal de la caseína utilizada como agente proinflamatorio en ratones, es capaz de inducir granulopoyesis en vivo e incrementar la producción de citocinas esenciales en dicho evento. Objetivo. Evaluar si el caseinato de sodio es capaz de inducir un efecto biológico en células de origen linfoide y la producción de citocinas involucradas con este linaje. Materiales y métodos: Se utilizaron ratones hembra BALB/c de 8 a 12 semanas de edad. Los animales se inyectaron cuatro veces, con intervalos de 48 horas, por vía intraperitoneal con 1 ml de caseinato de sodio (10 % de SFB p/v). La población de linfocitos B y la incorporación de bromodesoxiuridina (BrdU) se analizaron mediante citometría de flujo. La detección de la interleucina 7 se evaluó mediante la técnica de ELISA. Resultados. Tras la inyección por vía intraperitoneal, el número de linfocitos B 220+ provenientes del bazo de ratones tratados con caseinato de sodio aumentó comparados con los que solo recibieron el vehículo como tratamiento (89,01±1,03 Vs. 75,66±2,08), así como la incorporación de BrdU en células B220+ (38,59±4,48 Vs. 11,82±1,04). Se evidenció, asimismo, el incremento en la concentración de la interleucina 7 (IL-7) en el suero de los ratones tratados con caseinato de sodio, comparados con los que solo recibieron el vehículo (62,1±17,5 Vs. 26,9±4,4 pg/ml). Conclusión. El caseinato de sodio fue capaz de aumentar el número de linfocitos B en bazo de ratones, así como inducir la producción de IL-7, citocina clave para la linfopoyesis B.

Introduction: Sodium caseinate, a casein salt, is a proinflammatory agent in mice, and it is able to induce granulopoiesis in vivo and to increase the production of cytokines, which is key for this biological process. Objective: To assess whether sodium caseinate is able to induce a biological effect on cells from lymphoid origin and the production of cytokines involved in this lineage in vivo. Materials and methods: We used female BALB /c mice from 8 to 12 weeks old. The animals were injected intraperitoneally (IP) with 1 ml of sodium caseinate (10% PBS w/v) four times every 48 hours. The B cell populations and the incorporation of BrdU were analyzed by flow cytometry. Detection of interleukin-7 was assessed by ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay). Results: We established that after intraperitoneal injection, the number of B lymphocytes 220+ from the spleen of mice treated with sodium caseinate increased compared to those that only received the vehicle (89.01±1.03 vs 75.66 ± 2.08), and the same was observed with the incorporation of BrdU in B220 + cells (38.59±4.48 vs 11.82±1.04 respectively). We also established that the concentration of interleukin-7 (IL-7) in the serum of mice treated with sodium caseinate increased compared to those that only received the vehicle (62.1 ± 17.5 vs 26.9 ± 4.4 pg/ml). Conclusion: Sodium caseinate was able to increase the number of B lymphocytes in the spleen; it also induced IL-7 production, a cytokine that is key for the B cell lymphopoiesis.